1、这位同学，你要做流式的实验，必须明白最重要的一点，就是流式测的数据都是相对值。信号在多大范围，完全取决于加在PMT上的电压。所以你这个实验，必须要有一个没加染料的来设置阴性的阈值。还有一个实验对照组，加了染料，再有一个实验组，也加了染料。
2、流式细胞仪检测时 首先需要激发光照射到相应的荧光素上 产生发射光 检测系统可以捕捉到发射光（也就是荧光） 一般来讲现在激发波长都是488纳米 发射波长根据不同的荧光素而不同 荧光素 FITC、PE、PE-TR 的发射波长 分别为5257615纳米 当然还有其他荧光素，不一 一叙述。
3、流式细胞仪每一个信号通道在机器采集信号的时候，都会针对每一个颗粒（细胞）产生一个钟形的曲线。
ROS除以CCK8。根据查询中国生物工程学会得知，荧光强度与总细胞数的比值就是流式相对ROS水平，计算公式为ROS的检测值除以对应孔CCK8的检测值。
PI）的PBS缓冲液中（PI buffer：4 mM 柠檬酸钠（Trisodium Citrate）， 65 mM NaCl， PI 20 mg/mL， 0.03% Nonidet P-40 ， 配于H 2 O中）；7 避光冰上孵育10 min，上流式细胞仪测定细胞存活率。
流式检测ROS的特异性比较差。一般来说，针对过氧化氢和超氧化物有荧光探针。加到细胞培养液后，细胞摄龋遇到ROS，可以发出荧光，上机检测可以比较各组之间荧光强度的变化从而代表ROS水平的不同。你这个图横坐标代表的是相对荧光强度，纵坐标代表的是细胞计数。 图的含义就是在每个荧光强度有多少细胞。
1、DCFH-DA荧光探针可以通过被ROS氧化，使其发生荧光反应，从而用来测定细胞和组织中的活性氧水平。DCFH-DA分子在细胞内通过酯化酶水解为DCFH（2，7-二氯荧光素），DCFH与ROS发生氧化反应后，产生强烈的荧光信号。
2、活性氧检测试剂盒是利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。
3、DCFH荧光探针（货号：HCQ000679）DCFH，即2，7-二氯二氢荧光素，以其卓越的性质成为了ROS检测的明星探针。当它在细胞内遭遇ROS的氧化，会转化为亮绿色的2，7-二氯荧光素，展现出极高的荧光强度。这种脂溶性和透膜性的特性使其成为细胞内ROS监测的得力助手。
4、检测的必要性与方法 对于ROS的检测，科学家们已发展出多种方法，包括荧光染色法、电子顺磁共振（EPR）、化学发光、色谱和分光光度法等。其中，荧光染色法因其直观和简便，成为科研和临床研究中的常用手段。以DCFH-DA荧光探针为例，它能通过细胞膜，被活性氧转化为荧光信号，从而定量测量细胞内的ROS水平。
5、DCFH-DA通常用于直接测量细胞内的氧化还原状态。它能够进入细胞并被酯酶水解成不可渗透膜的DCFH，它可以在内部扩散并被非特定的氧自由基氧化，从而通过非荧光的中间自由基DCFH生成荧光的DCF。Amplex Red用于检测过氧化氢。化学发光法 化学发光分析通常用于超氧化物的检测。
1、流式检测ROS的特异性比较差。一般来说，针对过氧化氢和超氧化物有荧光探针。加到细胞培养液后，细胞摄龋遇到ROS，可以发出荧光，上机检测可以比较各组之间荧光强度的变化从而代表ROS水平的不同。
2、对于原位装载探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。对于收集细胞后装载探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接观察也可以。
3、在第72小时氮被重新供给，这也使细胞重新恢复细胞周期（图5C），这种现象是通过细胞密度和生存能力（图1）以及ROS积累量的减少（图2）反映出来的。以上的结果表明了ROS积累量的增加与细胞质膜和细胞周期产生消极影响现象之间有密切的联系。这两种在氮限制和在氮被重新补给的情况下的结果都支持这个假设前提。
4、细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。活性氧检测试剂盒。荧光法检测线粒体产生和释放的反应性氧化物（ROS）[10]。
